服务介绍
基因点突变细胞系是细胞基因研究方法中非常有用的一个手段，可以在细胞内原位对点突变的功能进行研究。在细胞系上实现高效的转染是实现基因点突变的前提。
基因点突变细胞系是细胞基因研究方法中非常有用的一个手段，可以在细胞内原位对点突变的功能进行研究。在细胞系上实现高效的转染是实现基因点突变的前提。
| 技术原理图：
| 技术流程图：
| 案例分析：
项目名称：构建Ret 基因点突变(E623K)的小鼠胚胎干细胞
实验设计：
种属：Mouse； 基因名称：Ret 突变信息：E623K（GAG to AAG）
WT序列：
gccagggcattaaagcaggctacggcatctgcaactgtttccctgatgagaagaaatgcttctgcGAGCCAGAGga
cagccagggtaagtcatgcctcccacacagttccccaacctcccctaaccctcaagggagtt
gRNA位点序列：GAAATGCTTCTGCGAGCCAGAGG
oligo序列：
ggcatctgcaactgtttccctgatgagaagaaatgcttctgcAAGCCAGAAgacagccagggtaagtcatgcctcccacacagttccccaacc
MT序列：
gccagggcattaaagcaggctacggcatctgcaactgtttccctgatgagaagaaatgcttctgcAAGCCAGAAga
cagccagggtaagtcatgcctcccacacagttccccaacctcccctaaccctcaagggagtt
备注：在E623K（GAG to AAG）基础上，引入同义突变E625E (GAG to GAA)防止发生gRNA位点被再次切割。
策略图
细胞信息
种属：Mouse； 细胞名称：胚胎干细胞
细胞检测
无菌检测：合格； 支原体检测：合格
细胞克隆形成率检测：细胞增殖能力较好，克隆形成率较好。
细胞基因型检测：针对gRNA打靶位置及其附近基因组序列进行测序, 测序结果与理论序列一致。
细胞转导
电转参数：1400V, 20ms, 1次； 电转体系：10 uL
PCR筛选
筛选克隆数量：185； 杂合子数量：19；纯合子数量：3
电泳图示例
WT：500 bp； 杂合子：500 bp； 纯合子：500 bp
测序结果
gccagggcattaaagcaggctacggcatctgcaactgtttccctgatgagaagaaatgcttctgcAAGCCAGAAga
cagccagggtaagtcatgcctcccacacagttccccaacctcccctaaccctcaagggagtt
克隆状态
400-829-0116
